紫外分光光度法測(cè)量蛋白質(zhì)的含量

紫外可見分光光度法是在190～760nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定物質(zhì)的吸光度，用于鑒別、雜質(zhì)檢查和定量測(cè)定的方法。當(dāng)光穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，物質(zhì)對(duì)光的吸收程度隨光的波長(zhǎng)不同而變化。因此，通過測(cè)定物質(zhì)在不同波長(zhǎng)處的吸光度，并繪制其吸光度與波長(zhǎng)的關(guān)系圖即得被測(cè)物質(zhì)的吸收光譜。從吸收光譜中，可以確定最大吸收波長(zhǎng)λmax和最小吸收波長(zhǎng)λmin。物質(zhì)的吸收光譜具有與其結(jié)構(gòu)相關(guān)的特征性。因此，可以通過特定波長(zhǎng)范圍內(nèi)樣品的光譜與對(duì)照光譜或?qū)φ掌饭庾V的比較，或通過確定最大吸收波長(zhǎng)，或通過測(cè)量?jī)蓚�(gè)特定波長(zhǎng)處的吸收比值而鑒別物質(zhì)。用于定量時(shí)，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)量一定濃度樣品溶液的吸光度，并與一定濃度的對(duì)照溶液的吸光度進(jìn)行比較或采用吸收系數(shù)法求算出樣品溶液的濃度。

光譜法（spectrometry）是基于物質(zhì)與電磁輻射作用時(shí)，測(cè)量由物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化的能級(jí)之間的躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射輻射的波長(zhǎng)和強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法。光譜法可分為發(fā)射光譜法、吸收光譜法、散射光譜法；或分為原子光譜法和分子光譜法；或分為能級(jí)譜，電子、振動(dòng)、轉(zhuǎn)動(dòng)光譜，電子自旋及核自旋譜等。
分光光度法是光譜法的重要組成部分，是通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。常用的技術(shù)包括紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法等。
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。在一定條件下，物質(zhì)的吸收系數(shù)是恒定的，且與入射光的強(qiáng)度、吸收池厚度及樣品濃度無關(guān)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后，可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸光度，即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收，但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測(cè)定，故又稱之為比色分析。
蛋白質(zhì)與生命的起源、存在和進(jìn)化都密切相關(guān),蛋白質(zhì)測(cè)定涉及到生產(chǎn)和利研的眾多領(lǐng)域。本試驗(yàn)用紫外分光光度法進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的測(cè)定,由此分析此方法的特點(diǎn)及適用條件。結(jié)果表明,紫外吸收法簡(jiǎn)單、迅速,且相對(duì)較為準(zhǔn)確,是測(cè)定低濃度蛋白質(zhì)含量的有效方法。
蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此，蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，其最大吸收峰位于280nm附近（不同的蛋白質(zhì)吸收波長(zhǎng)略有差別）。在最大吸收波長(zhǎng)處，吸光度與蛋白質(zhì)溶液的濃度的關(guān)系服從朗伯-比耳定律。該測(cè)定法具有簡(jiǎn)單靈敏快速高選擇性，且穩(wěn)定性好，干擾易消除不消耗樣品，低濃度的鹽類不干擾測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。

最后推薦一款可以應(yīng)用在紫外分光光度法中的紫外線傳感器，由工采網(wǎng)從國(guó)外引進(jìn)的告知紫外線傳感器 - GUVC-T10GD，該傳感器芯片大小0.4mm，TO 46封裝，使用鋁氮化鎵材料構(gòu)成，裝有肖特基光電二極管，具有光伏模式操作，有良好的日盲。廣泛應(yīng)用于：紫外線強(qiáng)度檢測(cè)和控制，UV指數(shù)檢測(cè)。戶外檢測(cè)UV指數(shù)設(shè)備等，還可以用于紫外線消毒和UV固化，用來監(jiān)測(cè)紫外線強(qiáng)度。UV火焰探測(cè)器等。容－源－電－子－網(wǎng)－為你提供技術(shù)支持

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